顆粒在線訊：近年來，3D生物打印由于可以制備用于再生醫(yī)學(xué)和疾病建模的具有多種細胞成分以及各種形態(tài)的3D組織模型，而在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用潛力越來越大。其中，生物墨水是3D生物打印的關(guān)鍵一環(huán)。由于具有仿生細胞外基質(zhì) (ECM) 特性，水凝膠是目前最常用的生物墨水。

然而，水凝膠生物墨水中的游離水在低溫下會形成致命冰晶，這使冷凍保存打印出的結(jié)構(gòu)變得十分困難。此外，游離水還存在蒸發(fā)、為細菌提供生存環(huán)境等問題。這些都極大地限制了水凝膠生物墨水的實際應(yīng)用。

為解決上述問題，來自東華大學(xué)游正偉教授團隊通過引入甘油來調(diào)節(jié)水的狀態(tài)，開發(fā)設(shè)計了一種多功能二元甘油水凝膠生物墨水。該生物墨水以明膠作為基體，以確保生物相容性。明膠通過席夫反應(yīng)與戊二醛交聯(lián)，形成相對穩(wěn)定的聚合物網(wǎng)絡(luò)。席夫堿包含動態(tài)亞胺鍵，使交聯(lián)能夠可逆地解離，并在3D打印結(jié)束后重新結(jié)合。

這種動態(tài)結(jié)構(gòu)演變賦予水凝膠剪切稀化和自愈合特性，以確保其在室溫下的可印刷性。同時，甘油、水和聚合物網(wǎng)絡(luò)之間形成的大量氫鍵可以減少游離水的含量，從而顯著抑制了細菌的生長、水分的揮發(fā)和生物墨水的結(jié)晶。該論文以題為“Intrinsically cryopreservable, bacteriostatic, durable glycerohydrogel inks for 3D bioprinting”發(fā)表在Matter上。

圖1. 多功能二元甘油水凝膠生物墨水的研制

甘油水凝膠生物墨水的機械性能、剪切稀化和自愈合特性

硫酸銨可以通過誘導(dǎo)明膠分子鏈的疏水折疊來改善水凝膠的機械性能。與不含硫酸銨的甘油水凝膠（G0.6T）相比，在混合有硫酸銨的甘油水溶液中浸泡后，甘油水凝膠（NG0.6T）的拉伸強度和最大伸長率分別提高了2.3倍和3.5倍。亞胺鍵可以在3D打印的剪切力下可逆地解離，賦予甘油水凝膠剪切稀化特性，以防止細胞因擠壓壓力而受損（圖2C ）。此外，在交替施加低和高應(yīng)變的流變測試中，水凝膠表現(xiàn)出良好的自愈合特性，在低應(yīng)變（1 %）時迅速從類凝膠行為（G'>G"）轉(zhuǎn)變?yōu)楦邞?yīng)變（500 %）時的類溶膠行為（G'<>< p=""><>

圖2. 甘油水凝膠生物墨水的機械性能、剪切稀化和自愈合特性

甘油水凝膠生物墨水的抗干燥和抗凍性能

作者將不含甘油的水凝膠和含甘油的水凝膠生物墨水置于37 ℃的干燥環(huán)境中，以評價其抗干燥性能。甘油水凝膠在3天內(nèi)保持了高透明度、高伸長率。如圖3F所示，甘油水凝膠在-80 °C下儲存后仍然保持彈性。作者使用DSC進一步評估甘油水凝膠的抗凍性能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在-100 °C至20 °C的DSC曲線中未檢測到甘油水凝膠的結(jié)晶峰，這表明其具有出色的低溫耐受性。

圖3. 甘油水凝膠生物墨水的抗干燥和抗凍性能

甘油水凝膠生物墨水的抑菌性能

進一步，作者利用大腸桿菌（革蘭氏陰性）在甘油水凝膠貼片上培養(yǎng)5天后活/死細菌的染色情況和細菌生長曲線評估了甘油水凝膠生物墨水的抑菌性能。結(jié)果表明，甘油水凝膠生物墨水顯示出明顯的抑制細菌生長的作用。這主要是由于甘油的存在降低了細菌內(nèi)游離水的含量，從而導(dǎo)致滲透壓降低，細菌細胞裂解。

圖4. 甘油水凝膠生物墨水的抑菌性能

3D打印甘油水凝膠生物墨水模型的維形能力和生物相容性

作者使用甘油水凝膠生物墨水3D打印了人類心臟，在打印完成3天和21天后，心臟支架的形狀保持率分別在98.07 %和78.96 %，高于普通水凝膠生物墨水。作者發(fā)現(xiàn)由于甘油具有低滲活性可以減少細胞內(nèi)水分子的外流，甘油水凝膠生物墨水對于細胞存活和增殖十分有利。此外，作者還發(fā)現(xiàn)甘油水凝膠生物墨水可以在-80 ℃的條件下較好地保持細胞活力，并且甘油濃度的增加可以提高冷凍保存效果。

圖5. 3D打印甘油水凝膠生物墨水模型的維形能力和生物相容性

結(jié)論

作者通過使用甘油來調(diào)節(jié)生物墨水中水的狀態(tài)，成功制備出了具有優(yōu)異抑菌性能、長期維形能力和低溫保存能力的多功能甘油水凝膠生物墨水。該生物墨水有望促進3D生物打印在體外建模和再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的實際利用。

來源：高分子科學(xué)前沿